4-nitrofenil beta-D-galactopiranósido CAS:200422-18-0

Efecto: A ONPG é un substrato empregado especificamente para detectar a presenza e a actividade do encima β-galactosidase. Cando o encima β-galactosidase está presente e activo, divide a ONPG en dous produtos: o-nitrofenol e un derivado da galactosa. A liberación de o-nitrofenol produce un cambio de cor amarela, que se pode medir cun espectrofotómetro.

Aplicación: A ONPG ten varias aplicacións na investigación en bioloxía molecular e bioquímica:

Determinación da actividade da β-galactosidase: a ONPG úsase habitualmente para medir e cuantificar a actividade do encima β-galactosidase. A velocidade de formación de o-nitrofenol, que é directamente proporcional á actividade do encima, pódese medir espectrofotometricamente.

Expresión e regulación xénica: a ONPG utilízase a miúdo en experimentos relacionados coa expresión xénica e os estudos de regulación. Úsase con frecuencia en ensaios de proteínas de fusión, como o sistema de fusión lacZ de uso común, para estudar a expresión de xenes baixo o control de promotores específicos. A actividade da beta-galactosidase medida con ONPG proporciona información sobre o nivel de expresión xénica.

Cribado da actividade da β-galactosidase: a ONPG pódese empregar como método de cribado colorimétrico na tecnoloxía do ADN recombinante para identificar a presenza e a funcionalidade do xene LacZ, que codifica a β-galactosidase. Este método de cribado axuda a identificar clons que conteñen o xene de interese.

Estudos de cinética encimática: a ONPG tamén é útil para estudar a cinética do encima β-galactosidase. Ao medir a velocidade da reacción encima-substrato a diferentes concentracións de substrato, é posible determinar parámetros cinéticos como as constantes de Michaelis-Menten (Km) e as velocidades de reacción máximas (Vmax).