4-Nitrofenil beta-D-galactopiranósido CAS:200422-18-0

Efecto: O ONPG é un substrato que se usa especificamente para detectar a presenza e actividade do encima β-galactosidase.Cando o encima β-galactosidase está presente e activo, escinde a ONPG en dous produtos: o-nitrofenol e un derivado da galactosa.A liberación de o-nitrofenol produce un cambio de cor amarela, que se pode medir mediante un espectrofotómetro.

Aplicación: a ONPG ten varias aplicacións na investigación en bioloxía molecular e bioquímica:

Determinación da actividade da β-galactosidasa: a ONPG úsase habitualmente para medir e cuantificar a actividade do encima β-galactosidasa.A taxa de formación de o-nitrofenol, que é directamente proporcional á actividade enzimática, pódese medir espectrofotométricamente.

Expresión e regulación xénica: a ONPG utilízase a miúdo en experimentos relacionados coa expresión xénica e estudos de regulación.Utilízase con frecuencia en ensaios de proteínas de fusión, como o sistema de fusión lacZ de uso común, para estudar a expresión de xenes baixo o control de promotores específicos.A actividade da beta-galactosidase medida mediante ONPG proporciona información sobre o nivel de expresión xénica.

Cribado da actividade da β-galactosidasa: a ONPG pódese utilizar como método de cribado colorimétrico na tecnoloxía do ADN recombinante para identificar a presenza e a funcionalidade do xene LacZ, que codifica a β-galactosidasa.Este método de cribado axuda a identificar clons que conteñen o xene de interese.

Estudos da cinética enzimática: a ONPG tamén é útil para estudar a cinética da enzima β-galactosidasa.Medindo a velocidade de reacción enzima-sustrato a diferentes concentracións de substrato, é posible determinar parámetros cinéticos como as constantes de Michaelis-Menten (Km) e as velocidades de reacción máximas (Vmax).