Hai moitos heroes descoñecidos ao noso redor, que parecen ser comúns, pero que en silencio contribúen moito a nós.A proteinase K é o "heroe descoñecido" na industria do diagnóstico molecular, aínda que en comparación coa "grande e poderosa" da industria, a proteinase K é tan discreta que hai tempo que pasamos por alto a súa importancia.Co estalido da nova epidemia da coroa, a demanda de proteinase K disparouse e a oferta na casa e no estranxeiro está moi por detrás do consumo, e de súpeto todos entenderon que a proteinase K é tan importante.
Para que serve a proteinase K?
A proteinase K é unha serina protease con actividade enzimática proteolítica e pode manter a actividade nunha ampla gama de ambientes (pH (4-12,5), tampón con alto contido de sal, temperatura elevada de 70 °C, etc.).Ademais, a actividade da proteinase K non é inhibida por SDS, urea, EDTA, clorhidrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc., e unha certa cantidade de deterxente tamén pode mellorar a actividade da proteinase K. No tratamento médico (desinfección por virus e microbios). ), alimentación (ablandización de carne), coiro (ablandamento do cabelo), elaboración de viños (clarificación alcohólica), preparación de aminoácidos (plumas degradadas), extracción de ácidos nucleicos, hibridación in situ, etc., proteinase K Hai aplicacións.A aplicación máis utilizada é a extracción de ácidos nucleicos.
A proteinase K pode enzimolizar todo tipo de proteínas da mostra, incluídas aquelas histonas que están fortemente unidas aos ácidos nucleicos, de xeito que os ácidos nucleicos poden ser liberados da mostra e liberados no extracto, facilitando o seguinte paso de extracción e purificación.Na detección do ácido nucleico viral, a proteinase K é un dos compoñentes importantes na solución de mostraxe do virus.A proteinase K pode rachar e inactivar a proteína da pelaxe do virus, que é máis segura durante a fase de transporte e detección;ademais, a proteinase K tamén pode degradar a RNase impide a degradación do ARN viral e facilita a detección de ácidos nucleicos.
A fama nocturna da proteinase K
Xa sexa no campo da investigación científica ou no campo da IVD, a extracción de ácidos nucleicos é o experimento máis básico, polo que a proteinase K sempre foi unha existencia moi importante.Non obstante, no pasado, a proteinase K era moito menos coñecida que o seu papel.Unha gran parte disto debeuse a que a relación oferta e demanda da proteinase K era moi estable.Poucas persoas pensarían que a subministración de proteinase K sería un problema.
Co estalido da nova epidemia da coroa, a demanda de probas de ácidos nucleicos aumentou.A finais de xuño de 2020, China completou case 90 millóns de novas probas de coroas, e este número é aínda máis alarmante a escala mundial.Nos experimentos de extracción de ácidos nucleicos, a concentración de traballo da proteinase K é duns 50-200 μg/mL.Xeralmente, son necesarios uns 100 μg de proteinase K para extraer unha mostra de ácido nucleico.No uso real, para aumentar a eficiencia da extracción de ácidos nucleicos, a miúdo empregarase a Proteinase K nunha cantidade maior.A detección de ácidos nucleicos do novo coronavirus trouxo unha gran cantidade de demanda de proteinase K.O equilibrio orixinal de oferta e demanda da proteinase K rompeuse rapidamente, e a proteinase K converteuse nun importante material de prevención de epidemias durante a noite.
Dificultades na produción de proteinase K
Aínda que co desenvolvemento da epidemia, o importante valor da proteinase K foi valorado pola xente, é vergonzoso que debido ao exceso de baixo perfil da proteinase K, poucas empresas nacionais estiveron implicadas na produción de proteinase K. Cando a xente quere establecer a produción de proteinase K Durante o proceso de produción, descubriuse que a proteinase K é unha proteína moi especial.É moi difícil ampliar a capacidade de produción da proteinase K nun curto período de tempo.
A produción a gran escala de proteinase K enfróntase ás seguintes dificultades
1. Baixa expresión
A proteinase K pode degradar de forma non específica a maioría das proteínas e causar toxicidade grave para a expresión da célula hóspede.Polo tanto, o nivel de expresión da proteinase K é xeralmente moi baixo.O cribado de sistemas de expresión e cepas que expresan altamente a proteinase K xeralmente require un ciclo máis longo.
2. Residuos de pigmentos e ácidos nucleicos
A fermentación a gran escala introduce unha gran cantidade de pigmentos e residuos de ácido nucleico do hóspede.É difícil eliminar estas impurezas cun proceso de purificación sinxelo e a purificación complexa aumenta o custo e reduce a taxa de recuperación.
3. Inestabilidade
A proteinase K non é o suficientemente estable, pode enzimolizarse por si mesma e é difícil almacenala de forma estable a 37 °C durante moito tempo sen un axente protector.
4. Fácil de precipitar
Ao preparar o po liofilizado de proteinase K, para garantir que o contido sólido de proteinase K no po liofilizado sexa grande, é necesario engadir un axente protector liofilizado nunha concentración elevada, pero cando o concentración de proteinase K alcanza os 20 mg/mL e por riba, é fácil A agregación forma un precipitado, o que trae grandes dificultades para a liofilización da proteinase K cun alto contido en sólidos.
5. Gran investimento
A proteinase K ten unha forte actividade protease e pode hidrolizar outras proteases no laboratorio.Polo tanto, a proteinase K require áreas de produción especializadas, equipos e persoal para investigación, desenvolvemento e produción.
Solución de proteinase K de XD BIOCHEM
XD BIOCHEM ten unha plataforma de expresión e purificación de proteínas maduras, e ten unha rica experiencia na expresión e purificación de proteínas recombinantes e optimización dos procesos de produción.A través da rápida formación dun equipo de investigación e desenvolvemento, superouse o proceso de produción a gran escala da proteinase K.A produción mensual de po liofilizado é de máis de 30 kg.O produto ten un rendemento estable, unha actividade específica enzimática elevada e non hai residuos de citocromo e ácido nucleico do hóspede.Benvido a contactar con XD BIOCHEM Obter un paquete de proba (correo electrónico:sales@xdbiochem.comTeléfono: +86 513 81163739).
As solucións técnicas de XD BIOCHEM inclúen
Usando a integración de plásmidos de varias copias, selecciónanse cepas de alta expresión cun nivel de expresión de 8 g/L, o que supera o problema do baixo nivel de expresión da proteinase K.
A través do establecemento dun proceso de purificación en varios pasos, o citocromo do hóspede e os residuos de ácidos nucleicos da proteinase K foron eliminados con éxito por debaixo do valor estándar.
A través do cribado de alto rendemento de formulacións de tampón protector, seleccionouse un tampón que pode almacenar de forma estable a proteinase K a 37 °C.
Os tampóns de cribado superan o problema de que a proteinase K é fácil de agregar e precipitar a altas concentracións, e senta as bases para a liofilización de alto contido sólido da proteinase K.
XD BIOCHEM proteinase K mostra
Proba de estabilidade da proteinase K XD BIOCHEM: non haberá cambios significativos na actividade despois de 80 d a temperatura ambiente
Proba de estabilidade da proteinase K XD BIOCHEM: non haberá cambios significativos na actividade despois de 80 d a temperatura ambiente.
Comparación do efecto de extracción de ácidos nucleicos da proteinase K de XD BIOCHEM e dos produtos competidores.No proceso de extracción de ácidos nucleicos utilízanse respectivamente XD BIOCHEM e proteinase K competitiva.A eficacia de extracción da proteinase K XD BIOCHEM é maior e o valor Ct do xene diana é menor.
Hora de publicación: 31-12-2021