Como determinar a concentración óptima?
Para o indutor IPTG (isopropil-beta-d-tiogalactósido), canto maior sexa a concentración, mellor.A concentración óptima depende das condicións experimentais específicas e do efecto de indución desexado.
Xeralmente, a concentración de IPTG úsase no intervalo de 0,1-1 mM.As concentracións máis baixas poden reducir os efectos adversos sobre o crecemento celular e poden reducir a citotoxicidade debido á sobreexpresión das proteínas diana.As concentracións máis altas poden causar unha carga metabólica celular excesiva, afectando o crecemento celular e a eficiencia da expresión.
A forma de determinar a concentración óptima pode ser avaliar o nivel de expresión da proteína diana realizando probas de indución de IPTG a diferentes concentracións.As probas de cultivo a pequena escala pódense realizar utilizando un intervalo de concentracións de IPTG (por exemplo, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) e o efecto da expresión a diferentes concentracións pódese avaliar detectando o nivel de expresión da proteína diana (por exemplo, Western detección de mancha o fluorescencia).Segundo os resultados experimentais, seleccionouse a concentración con mellor efecto de expresión como a concentración óptima.
Ademais, tamén pode consultar a literatura relevante ou a experiencia doutros laboratorios para comprender o intervalo de concentración de IPTG de uso común en condicións experimentais similares e, a continuación, optimizar e axustar segundo as necesidades experimentais.
É importante ter en conta que a concentración óptima pode variar dependendo de diferentes sistemas de expresión, proteínas diana e condicións experimentais, polo que é mellor optimizar caso por caso.
Hora de publicación: 28-09-2023